Pracownia Mikroskopii Optycznej


I. Obrazowanie znakowanych fluorescencyjnie próbek metodą laserowej skaningowej mikroskopii fluorescencyjnej

  • Czas: 10 h
  • Prezentacja na żywo obrazów uzyskiwanych za pomocą tradycyjnej mikroskopii świetlnej oraz fluorescencyjnej z użyciem okularu i kamery. Omówienie problemów związanych z uwidocznieniem preparatu, rozdzielczością i głębią ostrości.
  • Omówienie zasady działania fluorescencyjnego skaningowego mikroskopu konfokalnego (FSCM). Definicja objętości konfokalnej, jej powiązanie z aperturą numeryczną, głębią ostrości.
  • Prezentacja obrazów uzyskanych z FSCM i porównanie z obrazami z mikroskopii świetlnej i fluorescencyjnej. Granice dyfrakcyjne rozdzielczości FSCM i mikroskopu świetlnego.
  • Wprowadzenie pojęcia czasu życia fluorescencji, pomiar czasu życia dla barwnika w roztworze. Różnicowanie obrazu na podstawie czasu życia fluorescencji (FLIM) – prezentacja techniki. Omówienie zalet i ograniczeń.
  • Potencjał techniki FRET w obrazowaniu – omówienie i prezentacja na żywo (w miarę uzyskania świeżych lub trwałych preparatów).
  • Wizualizacja ruchów Browna na przykładzie obserwacji ruchu dużych cząsteczek znakowanych fluorescencyjnie.
 

II. Pomiar współczynnika dyfuzji fluoroforów metodą spektroskopii korelacji fluorescencji (FCS).

  • Czas: 10 h
  • Wstęp teoretyczny dotyczący: 
    • zjawiska dyfuzji własnej (samodyfuzji)
    • geometrii eksperymentu FCS
    • funkcji korelacji fluktuacji sygnału fluorescencji pochodzącego od dyfundujących cząsteczek fluoroforu
    • biochemicznych i fizycznych zastosowań pomiarów FCS
    • porównania z innymi technikami pomiaru współczynników dyfuzji (NMR, DLS)
  • Pomiar czasów dyfuzji wzorcowych fluoroforów (kalibracja)
  • Badanie wiązania (specyficznego lub niespecyficznego) barwników lub znakowanych ligandów do większych obiektów (białka, micele)
  • Pomiar zależności współczynnika dyfuzji fluoroforu od stężenia zawiesiny.
  • Pomiar współczynnika dyfuzji w matrycach żelowych (żel poliakrylamidowy, soczewka kontaktowa)
 

III. Techniki ekstremalne na bazie konfokalnych mikroskopów fluorescencyjnych (wzbudzanie dwufotonowe, TIRF, STED)

  • Czas: 10h
  • Wstęp teoretyczny dotyczący wzbudzania dwufotonowego w układzie poziomów wirtualnych i rzeczywistych.
  • Prezentacja obrazów uzyskanych przy wzbudzaniu dwufotonowym. Pokazanie wpływu gęstości mocy na wydajność zjawiska. Regulacja zarówno mocą lasera jak i wielkością ogniska (różne obiektywy)
  • Całkowite wewnętrzne odbicie, efekt naskórkowy – wprowadzenie teoretyczne
  • Pokaz dyfuzji dużych fluoroforów przy dnie metodą TIRF. W przypadku dostępności preparatu błony z wbudowanymi fluorofortami możliwość obserwacji ruchów Browna w 2D.
  • Przekraczanie dyfrakcyjnych barier rozdzielczości mikroskopu – wstęp teoretyczny.
  • Pokaz techniki STED – superrozdzielczość.

Kontakt | Baza kontaktów | RSS | Login
© 2017 CENTRUM NANOBIOMEDYCZNE UAM | ul. Umultowska 85, PL61614 Poznań, Poland | tel.+48 61 829 67 04.

Developed by drupalninja.pl